超微粉碎決明子對其大黃酚溶出量的影響
                                        李曉明，王躍生，閆寒，章軍，唐曉軍
                               （中國中醫研究院中藥研究所，北京     100700）

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摘要：對超微粉碎后決明子進行大黃酚溶出量的對比研究.  結果表明：在相同提取時間和條件下水煎煮決明子藥材，大黃酚的提取率只有7.6%，而經不同條件超微碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；5min水浸泡下，決明子微粉中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當.粉碎前對樣品進行適當干燥可提高總大黃酚的溶出量.
關鍵詞：超微粉碎；決明子；大黃酚
中圖分類號：R284.1  文獻標識碼：B     文章編號：1005-9903（2001）06-0006-03

    超微粉碎技術在中藥領域中的應用是近年來興起的一項新技術。經超微粉碎后中藥材，粒度細微均勻，細胞壁多被破碎，甚至完全破碎，因而比表面積增加，有利于內容物的溶出，便于有效成分的提取。所以，采用超微粉碎技術處理中藥材是該技術在中藥領域中應用的一個重要方面，因而合理應用該技術具有較現實的研究意義。
    決明子為豆科植物決明Cassia  obtusifolia L.或小決明子C.tora L.的成熟種子，為常用中藥[1]。決明子具有驅風散熱、清肝明目、潤腸通便功能，臨床常用于治療目赤腫痛、青盲、雀目、大便秘結等癥。現代研究表明，決明子含蒽醌含量最高，文獻報道約為0.25%[2]，總蒽醌含量約為0.61%[3]；另外還含有維生素A樣物質、粘液、蛋白質、谷甾醇、氨基酸及脂肪油等成分。近年來研究證明，決明子還具有降壓作用[4]，此外，決明子還具有降壓作用[5]及明顯改善體內膽固醇的分布，這些均有利于預防動脈粥樣硬化[6]等心腦血管疾病。本文擬研究經超微粉碎后的決明子，其微粉中對所含蒽醌類化合物大黃酚溶出量的影響。

1、儀器與材料
1.1儀器  超微粉碎機：型號：SQW-6型超微粉碎機。
1.2日立7400液相色譜儀。
1.3藥材  決明子由同仁堂飲片廠提供，為C. obtusifolia L.T C.tora L.的成熟種子的混合物；決明子經超微粉碎加工并提供粒度的測定在電腦成像粒度分析儀上進行，各微粉樣品的粉碎條件如下：

1.4試劑  大黃酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:796-9302)。甲醇為色譜純，氯仿、磷酸為分析純，水為超純水。

2、方法與結果
2.1色譜條件  色譜柱：YWGC1810µm（4.6mm×250mm）,流動相：甲醇-0.1%磷酸液（90：10），流速：1ml/min，檢測波長：254nm，柱溫：30℃。

2.2標準曲線制備  精密稱定大黃酚對照品4.18mg，用甲醇溶解并定容于50ml棕色量瓶中，精確吸取0.5、1.0、2.0、4.0、5.0ml于5個10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按色譜條件測定，進樣量為20µl。線性范圍0.0836～0.8360µg,線性回歸方程為y＝2.69×106X-7.83×103，r＝0.9998。

2.3精密度試驗  取大黃酚對照品溶液，重復進樣5次，每次10µl，對照品大黃酚峰面積積分值的RSD為1.4%。

2.4  穩定性試驗  取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′），在0、2、4、6hr分別進樣10µl，記錄峰面積，結果4次進樣峰面積RSD為1.9%。

2.5  重復性試驗   取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）5份。按樣品測定法測定，結果大黃酚的平均含量為1.34mg/g，RSD為1.8%。

2.6加樣回收試驗  取已知含量的決明子微粉樣品（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）約0.10g，精密稱定，加入對照品溶液適量（0.116～0.155mg），揮干，按樣品測定法測定，平均回收率為93.5%，RSD為2.5%（n=4）。

3 供試品溶液制備與測定
3.1取決明子粉末（用小型粉碎機粉碎，過40目篩，不去皮）2g，精密稱定，用索氏提取器甲醇提取至無色提取液定容于100ml量瓶；精密吸取該提取液10ml于蒸發皿中，50℃水浴蒸干，加2ml 2.5mol/L硫酸液溶解殘渣，洗入20ml具塞試管，沸水浴上水解2h，間斷振搖提取三次（8、8、4ml），合并氯仿液，用蒸餾水洗滌二次，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，搖勻，即得。

3.2取決明子約10g共5份，精密穩定，分別加蒸餾水100ml于具塞三角瓶中，稱重，加熱回流15′、30′、45′、60′、90′，放冷，稱重，加蒸餾水補足重量，搖勻，過濾，濾液待用；精密吸取以上各提取液10ml，于蒸發皿中，水浴蒸干，置干燥器中至恒重，稱重，用于浸出物量測定。

3.3  超微粉碎前決明子中總大黃酚含量及提取率的測定   吸取上述五組提取液2ml至大試管中，加5mol/L硫酸液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結果見表1：
表1不同提取時間對決明子總提取物含量和總大黃酚含量的影響

3.4超微粉碎后決明子中總大黃酚含量測定   取決明子各微粉組之微粉約1g共4份，置具塞三角瓶內，加蒸餾水50ml，在80℃水浴上溫浸5、15、30、45min；取出，放冷，離心，吸取上清液2ml置于20ml具塞大試管，加5mol/L硫酸溶液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結果見表2、表3：


4討論
4.1粉碎條件與粒度的相關性  從“決明子粉碎條件及粒度”表中可以看出：①物料的干燥程度或含水率對粉碎細度有直接的影響，即含水率越低有助于粉碎成細顆粒；②當含水率相同時，粉碎時間越長粉碎的粒度越細小，但粉碎到一定的時間點時，再延長粉碎時間，則對粒度的影響變小，提示：對決明子的粉碎時，存在最佳粉碎條件的確定問題。

4.2粉碎前后決明子總大黃酚提取率的比較
①從表1中可以看出，未粉碎決明子在提取條件相同的情況下，提取時間越長，提取率越高，煮提3次，每次30min時，提取率可達到71.0%。

②從表3中可以看出，超微粉碎后，提取時間的延長對提取率影響不大，提示：經超微粉碎后，細胞壁被破碎，有助于總大黃酚的溶出，且溶出速度加快，提取5min時，即可達到或接近濃度平衡；實驗中還發現，隨著提取時間的延長，溶液的粘稠度也不斷增加。兩者比較：水煎煮決明子藥材（提取15min），大黃酚的提取率只有7.6%（以索氏提取器為計），而經不同條件超微粉碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；如按提取總大黃酚含量不變比較，在80℃、5min水浸泡下，決明子微粉（干燥4h、粉碎32min）中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當。

③從表3中可以看出：用相同的提取時間下，粒度越細，溶出量越高，如粉碎25min、提取5min組，未干燥溶出量為0.42，干燥1h為1.60，而干燥4h為1.73。但從延長粉碎時間、增加細度的樣品組看，細度越小，溶出量反而下降，尤其是粉碎40min組，溶出量下降明顯；而未干燥組，由于粉碎時間延長，對粒度影響不大，因此對溶出量的減少不明顯，提示：粉碎時間的延長，對總大黃酚類成分有一定影響，說明，從有效成分的溶出和保留來看，也存在最佳粉碎條件的確定問題。可見，超微粉碎技術應用于中藥的粉碎時，存在一定的應用規律和應用條件等科學問題，并不是一個簡單的粉碎過程，應引起足夠的重視。

   在本實驗中，將決明子粉碎去皮，其總大黃酚含量增加近74%，提示蒽醌類物質主要存在于果實中，皮中含量較少；游離的大黃酚僅占總大黃酚含量的1.47%。此外，有關超微粉碎后對決明子中蒽醌類成分穩定性的研究及相關藥效學研究正在進行中。

參考文獻：
[1]中華人民共和國藥典一部[S].北京：化學工業出版社.2000.12.
[2]張啟偉，陰健，張俊，等.生、炒決明子及其煎劑中部分活性成分的比較[J].中草藥，1996，27（2）：79.
[3]王慕鄒，梁彬，沙世炎，等.植物藥中一些主要成分測定方法的研究Ⅲ.蒽醌的測定方法[J].藥學學報1963，10（12）：720.
[4]曾大富，陳建民，連文沃，等.中國決明子屬研究進展[J].川藥校刊，1991，（4）：35.
[5]劉菊秀，苗戌，狄俊英，等.決明子降壓作用的實驗研究[J].天津中醫，1990，（5）：37.
[6]陳衛星，刁國俊，蔣文娟，等.決明子對高膽固醇血癥小鼠模型的影響[J].中草藥，1991，22（2）：72.

相關關鍵詞：超微粉碎機,低溫粉碎機